A) 系統(tǒng)污染、惰性下降

　　系統(tǒng)惰性不好對活性組分峰形及響應(yīng)的影響尤為明顯。建議選用惰性優(yōu)異的低流失氣相色譜柱和色譜耗件，如去活的襯管。如果系統(tǒng)已經(jīng)被污染，應(yīng)及時對進(jìn)樣口和檢測器進(jìn)行維護(hù)。恢復(fù)被污染色譜柱的方法主要有：

　　將進(jìn)樣口端截去 0.5~1 米，根據(jù)樣品來源做進(jìn)一步的判斷，如果是半揮發(fā)污染物，還可以進(jìn)一步考慮對色譜柱進(jìn)行老化。

　　污染嚴(yán)重時可截去更長或用溶劑*清洗色譜柱（必需是交聯(lián)鍵合固定相）

　　B) 色譜柱安裝不正確或系統(tǒng)其他部位存在死體積

　　毛細(xì)管柱在進(jìn)樣口和檢測器的安裝位置不當(dāng)將影響峰形，請嚴(yán)格按照儀器的使用說明正確安裝色譜柱。其他與毛細(xì)管柱相連接的部位也應(yīng)注意降低死體積。

　　C) 系統(tǒng)漏氣

　　需定期檢查系統(tǒng)氣密性、更換進(jìn)樣口備件。使用非純石墨密封圈時，注意安裝后的幾次溫度升降之后追加一次擰緊。

　　D) 方法條件不佳

　　對于低揮發(fā)性樣品，需注意提高進(jìn)樣口和/或檢測器、色譜柱、傳輸管線等處的溫度，防止冷凝現(xiàn)象。

　　有些樣品在某些檢測器的響應(yīng)確實不高（甚至沒有響應(yīng)），如果樣品不出峰，又沒有參考響應(yīng)值，應(yīng)加大進(jìn)樣量確認(rèn)出峰位置，并利用標(biāo)樣考查樣品的響應(yīng)值。

　　E) 其他可能導(dǎo)致峰拖尾的原因：

　　1 不分流模式下，分流放空閥開啟過晚（通常應(yīng)在 0.5~1.0 分鐘之間）

　　2 手動進(jìn)樣速度過慢

　　3 檢測器尾吹氣流量不足

　　4 PLOT 色譜柱樣品過載

　　5 組分共流出

　　6 含磷化合物在 NPD 白色銣珠上易拖尾，建議使用黑色銣珠。

　　A) 正確的安裝，好的開始是成功的一半！

　　1 區(qū)分進(jìn)樣口端與檢測器端，鐵標(biāo)簽上的字正對安裝者。

　　2 確保進(jìn)樣口的潔凈度，如有污染，請更換襯管和分流平板。

　　3正確切割KB毛細(xì)管柱

　　4 安裝之后做好氣相色譜柱配置（EPC 系統(tǒng)，輸入色譜柱規(guī)格后，請進(jìn)行柱長校正）

　　5對新色譜柱進(jìn)行適度老化

　　B) 正確的使用

　　1 請勿劃傷色譜柱表面的聚酰亞胺涂層，因此不要將色譜柱與尖銳的表面直接接觸。

　　2 注意色譜柱盒包裝側(cè)面的溫度上下限。

　　舉例：KB-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm，溫度限為-60 o C 至 325 o C/350 o C。三個溫度從左

　　到右的含義分別是：

　　溫度下限：低于此溫度使用可以導(dǎo)致柱效下降，但對色譜柱沒有損害。

　　恒溫溫度上限：恒溫使用色譜柱時，此溫度為******上限。

　　程序升溫溫度上限：程序升溫使用此色譜柱時，可升至此溫度，但不可超過 15 分鐘。

　　1 確保密封無漏氣 (使用純度高的載氣，新的進(jìn)樣隔墊，規(guī)格合適的密封圈都是必需的)

　　2 做好樣品前處理，防止將不揮發(fā)的物質(zhì)及對色譜柱傷害較大的化合物(如：無機(jī)酸和堿)

　　引入色譜柱中，如果無法將這此物質(zhì)在進(jìn)樣前除去，請在分析柱前接保護(hù)柱。

　　C) 氣相色譜柱正確的保存

　　1 氣相色譜柱不使用時，請從 GC 上卸下，并用舊的密封隔墊將其兩端封住。下一次使用時，需要把色譜柱兩端修整掉 2-4cm，以確保隔墊碎屑不會堵塞色譜柱。

　　2 如果把色譜柱留在加熱的 GC 中，一定要保證始終有載氣通過氣相色譜柱。

　　氣相色譜儀啟動后不久或氣相色譜柱更換后不久，噪聲是不可避免的，這是正常現(xiàn)象。噪聲過大是指比正常的標(biāo)準(zhǔn)高得多的噪聲或某些不正常的突變。

　　注意：發(fā)現(xiàn)噪聲過大時，請先檢查氣相色譜儀和積分儀使用的電網(wǎng)電源是否有異常波動或突變，特別是在同一電網(wǎng)電源上接有大功率裝置時，更要注意。此外，請檢查儀器的接地是否正確并且良好。

　　A.改變量程范圍，噪聲的大小還是基本不變時，要考慮是否信號線的故障、放大器電路板的故障、輸出信號線的故障、積分儀的故障。

　　B.將火焰熄滅之后噪聲如果還是很大，要考慮從檢測器到放大器電路板這一段是否存在問題，請進(jìn)行下列項目的檢查：

　　1).檢查檢測器的噴嘴、收集極、離子信號線插座、點火線等部分是否固定可靠，請排除接觸不良的可能。

　　2).檢查檢測器是否被污染，如果污染請進(jìn)行清洗。

　　3).要考慮是極化電壓、放大器電路板、工作電源的故障。

　　C.將火焰熄滅之后噪聲如果降低或消失，要考慮是否檢測器本身產(chǎn)生過大噪聲：

　　1).檢查是否使用的氣體純度太低，請更換氣體或使用氣體過濾器去除氣體中的雜質(zhì)。

　　2).檢查檢測器是否被污染，如果污染請進(jìn)行清洗。

　　3).檢查空調(diào)器等冷暖設(shè)備的排風(fēng)是否正對著氣相色譜儀，請改變風(fēng)向或更換儀器的位置。

　　D.降低進(jìn)樣口溫度后如果噪聲變小，要考慮是否進(jìn)樣口有污染現(xiàn)象。

　　E.降低氣相色譜柱溫度后如果噪聲變小，要考慮是否載氣純度不夠或色譜柱的老化不足，請更換載氣或使用氣體過濾器去除載氣體中的雜質(zhì)，并對色譜柱進(jìn)行老化。

　　氣相色譜儀（柱）的選擇

　　F.如果需要更換氣相色譜儀，氣相色譜柱。

　　1、毛細(xì)管柱載氣流量的選擇

　　通過毛細(xì)管柱的載氣流量要根據(jù)毛細(xì)管柱的柱長、柱徑、膜厚以及被分析物的組成等綜合因素設(shè)定。高流速雖然可以提高分析效率，但有時可能會因被測物與固定相之間交換不充分而降低柱效。因此，在實際分析中，流速的設(shè)定應(yīng)在滿足分離的前提下適當(dāng)增加，以提高分析效率。對于氣相色譜-質(zhì)譜儀，還要考慮質(zhì)譜真空泵的抽氣量，氣流速大還會影響到靈敏度。

　　某些檢測器，如電子捕獲檢測器，僅靠通過毛細(xì)管色譜柱的載氣流量無法滿足工作需求，因此，還需要補充加上尾吹氣。另外，有些廠家的儀器采用在毛細(xì)管柱的末端加上尾吹氣的設(shè)計，以減少擴(kuò)散，改善色譜峰形，提高信噪比。

　　2、毛細(xì)管柱柱溫的選擇

　　柱溫是影響色譜分離和分析效率的***重要參數(shù)，所以要根據(jù)分析目的和被測物性質(zhì)，如：被測物的沸點、被測物極性、被測組分的多少，通過實驗優(yōu)化得到合適的柱溫。交聯(lián)型毛細(xì)管色譜柱相對而言柱流失比較少，可以在較高溫度下工作。分析中通常采用程序升溫模式，從而提高分離度和柱效。

　　(1) 初始溫度的選擇

　　初溫的確定取決于譜圖上***早流出峰的分離度，一般應(yīng)低于樣品中******沸點組分的溫度。

　　(2) 升溫速率的選擇

　　升溫速率對色譜分離度和峰形的影響******，對于多組分分析，可以設(shè)置多階、不同升溫速率的升溫程序，以得到******的分離效果和峰形。

　　(3) 終點溫度的選擇

　　程序升溫***終溫度的確定主要取決于固定相和被測樣品中******沸點的物質(zhì)。另外，對于基質(zhì)復(fù)雜的樣品，可以考慮在固定相規(guī)定******溫度下適當(dāng)提高溫度（但接質(zhì)譜******不要這樣做），并且在此溫度下適當(dāng)延長保持時間。

　　3、進(jìn)樣方式的選擇

　　對于毛細(xì)管色譜分析有多種進(jìn)樣方式可以選擇。殘留分析應(yīng)選擇不分流進(jìn)樣或柱上進(jìn)樣，純度分析則多選擇分流進(jìn)樣，分流比根據(jù)被測物含量而定。但分流進(jìn)樣對定量精度會有影響，分流比越大定量精度越差。

　　4、毛細(xì)管柱的選擇

　　固相萃取裝置是一種被廣泛應(yīng)用且備受歡迎的樣品前處理技術(shù),就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。它在傳統(tǒng)的液—液萃取基礎(chǔ)上采用物質(zhì)間相似作用的相似相溶原理并結(jié)合目前廣泛應(yīng)用的液相色譜和氣相色譜固定相基本知識發(fā)展而來。

　　三種固相萃取柱的操作方法介紹：

　　一、反相萃取柱操作

　　從極性基體中提取非極性的樣品

　　1、活化：以3—5毫升甲醇淋洗萃取柱;以3—5毫升去離子水(或緩沖液)淋洗萃取柱并保持萃取柱濕潤

　　2、上樣：以合適的流速使樣品均勻通過萃取柱

　　3、清洗：以5毫升適當(dāng)極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱(常用的有純水,緩沖液,水/有機(jī)溶劑混合液)

　　4、洗脫：將被測樣品,用1—5毫升非極性溶劑分批洗脫至收集容器

　　二、正相萃取柱操作

　　從非極性基體中提取極性的樣品

　　1、活化：3—5毫升非極性溶劑淋洗萃取柱

　　2、清洗：以5毫升適當(dāng)非極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱

　　3、洗脫：將被測樣品,用1—5毫升極性溶劑分批洗脫至收集容器

　　三、離子交換萃取柱

　　提取帶電荷的樣品

　　1、活化：以3—5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱

　　2、上樣：以較低的流速,使樣品均勻通過萃取柱

　　3、清洗：5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱

　　4、洗脫：將被測樣品,用1—5毫升高離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫至收集容器

　　四、固相萃取柱的選擇

固相萃取柱目錄：

　　1：石墨化炭及復(fù)合S系列(農(nóng)殘)，固相萃取柱

　　2：聚合物基質(zhì)S系列(HLB-MCX-MAX-WCX-WAX)固相萃取柱

　　3：硅膠基質(zhì)正相S系列(硅膠-氟硅土-氧化鋁-Diol-PSA-氨基)固相萃取柱

　　4：硅膠基質(zhì)離子交換S系列(SAX-SCX-PRS)固相萃取柱

　　5：硅膠基質(zhì)反相S系列（C18-C8-CN)固相萃取柱

　　6：前處理及分析應(yīng)用（固相萃取）固相萃取柱

　　7：C8-SCX-SAX混合S系列（藥物代謝及濫用)固相萃取柱

　　離子色譜是液相色譜的一種，故又稱離子色譜（HPIC）或現(xiàn)代離子色譜，其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量，進(jìn)樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對淋出液進(jìn)行在線自動連續(xù)電導(dǎo)檢測。

　　離子色譜儀的使用：

　　1、流動相瓶中濾頭要注意始終處于液面以下，防止將溶液吸干。

　　2、啟動泵前觀察從流動相瓶到泵之間的管路中是否有氣泡，如果有則應(yīng)將其排除。

　　排除方法如下：先將與泵相連的塑料流路接頭擰下來，用洗耳球吸滿去離子水，從與泵段相連的流路管中注入，將流路管中的氣泡排除干凈。然后再將流動相瓶(一般為去離子水瓶)抬高，再將流路接頭與泵連接好。啟動泵，打開泵內(nèi)排氣閥選鈕，將泵內(nèi)氣泡排除干凈，一般觀察為流出液比較均勻，再將泵排氣閥擰緊。(注意：此項操作時，整個流路是與色譜柱斷開的)

　　3、用去離子水或流動相清洗整個流路時，可以采用大流量清洗(一般可將流量設(shè)置為2.0ml/min，但不能再太大)以縮短清洗時間，但在通流動相接色譜柱時需要將流量調(diào)整為色譜柱使用流量條件。

　　操作如下：先將泵停止，再按動正號或負(fù)號，將光標(biāo)調(diào)整至流量位置，按下確認(rèn)鍵，再通過調(diào)節(jié)正負(fù)號將流量調(diào)節(jié)至色譜柱使用條件后，再按確認(rèn)鍵。此時需要等待5s后再啟動泵開關(guān)。接色譜柱時注意先將接頭在色譜柱前端抵上2-5s，將色譜柱前端氣泡排除后再將接頭擰緊。待色譜柱下端流出溶液后，在將色譜柱下端接頭擰上。(注意：接頭不能擰的太緊，防止將管路卡的太緊而造成系統(tǒng)壓力增大，擰的程度以不漏液為宜)

　　4、使用陰離子色譜柱檢測，通流動相時注意將電流旋鈕打開，調(diào)節(jié)至90-100mA，使用完畢后要將電流旋鈕關(guān)閉。

　　5、進(jìn)樣時閥的扳動要注意，不能太快，以免損傷閥體;也不能太慢，以免造成樣品流失。在進(jìn)樣過程中，要嚴(yán)格按清洗程序操作，以減小前次樣品殘留對本次檢測的影響。

　　隨著人們對產(chǎn)品質(zhì)量意識的日益加強(qiáng)，化學(xué)分析儀器的自動化程度不斷提高，化驗室中分析天平的使用也越來越廣泛了。電子分析天平雖操作簡單，但日常維護(hù)也是*的。日常要注意以下幾點：

　　1、將天平置于穩(wěn)定的工作臺上，避免振動、氣流及陽光照射，防止腐蝕性氣體的侵蝕。高精度的電子天平要滿足說明書要求的溫度和濕度波動的條件，才能達(dá)到規(guī)定的稱量準(zhǔn)確度要求。

　　2、稱量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時，要盛放在密閉的容器中，以免腐蝕和損壞電子天平。

　　3、秤盤和外殼可以用軟布輕輕擦凈，切不可用強(qiáng)溶劑擦洗。

　　4、防止超載，注意被稱物體的質(zhì)量應(yīng)在天平的******載量以內(nèi)，電子天平大多都有保護(hù)裝置，但超載可能會損壞天平!

　　5、較長時間不使用的天平，應(yīng)每隔一定時間通一次電，以保證電子元器件的干燥。電子天平搬動和運輸時應(yīng)將秤盤和托盤取下。

　　6、稱量室不要放置干燥劑，因為干燥劑的吸水和放水形成了不同方向的氣流，引起空氣浮力的變化，導(dǎo)致稱量不穩(wěn)定。

　　7、經(jīng)常對電子天平進(jìn)行自校或定期外校，保證其處于******狀態(tài)。

　　由于分光光度計是一種常用的實驗室分析儀器，所以無論是從款式上還是價格上五花八門，一般往往給初購者造成眼花繚亂、令人無所適從的感覺；價格因素一般是購買者首先考慮的問題，盡管分光光度計種類繁多，但不外乎：簡易型、中檔型和型三大類：

　　(1)簡易型儀器及其特點：

　　結(jié) 構(gòu)：這種類型的儀器多為單光束型，即只有一束光照射到樣品室內(nèi)；光源一般僅有鎢燈；樣品支架一般為推拉式四聯(lián)池架；波長選擇多為手動查找，重復(fù)性差；狹縫為一個固定寬度模式；光學(xué)性能指標(biāo)較低；檢測器多為光敏二極管；顯示器多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示器，數(shù)據(jù)處理器一般沒有。此類儀器生產(chǎn)以國內(nèi)廠家居多。測量模式：多為定點(固定波長)吸光度或透過率測量方式，基本不能進(jìn)行波長掃描測量。適應(yīng)范圍：小型實驗室及示范教學(xué)，分析樣品相對簡單，測試結(jié)果精度要求不高。

　　(2)中檔型儀器及其特點：

　　結(jié) 構(gòu)：此類儀器多為雙光束型或準(zhǔn)雙光束型，但也有單光束儀器型；光源有鎢燈和氘燈；樣品池支架為兩個固定式，分別是樣品通道和參比通道；波長按照設(shè)定模式自動查找或掃描；狹縫多數(shù)仍為2nm固定寬度模式,也有1.5nm狹縫寬度的；檢測器多數(shù)是硅光二極管，但也有少數(shù)用光電倍增管的；光學(xué)性能相對較高，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要，******的光柵為凹面型，為此無論在分辨率還是在雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡易型儀器；顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計算機(jī)處理。并有一定的測量附件。測量模式：透過率、吸光度、濃度直讀、單光束;單點及掃描均可。適應(yīng)范圍：此類儀器基本可滿足大多實驗室分析需要。

　　(3)型儀器及特點：

　　結(jié)構(gòu)：除了中檔儀器的特點外，主要是光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計和制造工藝水平更高了，比如使用了大尺寸的凹面光柵，并且光柵刻槽數(shù)大于1800條/mm;波長檢測范圍有的儀器在近紅外區(qū)已經(jīng)超過1100nm，可達(dá)到2600nm;狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，以適應(yīng)高分辨率的需要，波長掃描速度的檔位也增加了，檢測器均使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器;數(shù)據(jù)處理目前基本是電腦來執(zhí)行;衡量一臺儀器的另外一個指標(biāo)是看此儀器是否具有豐富的附屬測量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進(jìn)樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等等。測量模式：透過率、吸光度、濃度直讀、反射方式、能量方式，單點、掃描均可;適應(yīng)范圍：科研、光學(xué)產(chǎn)品的檢測、生化樣品檢測、復(fù)雜樣品檢測等。不但可以測液態(tài)樣品，也可測固態(tài)樣品。

　　色譜分析過程中，緩沖液是*的，因為要用它來調(diào)節(jié)流動相的pH值，緩沖鹽使用不當(dāng)，后果可是吃不了兜著走。比如說，色譜柱壓升高、柱效下降、保留時間異常等等不良影響、

　　1）柱壓升高；

　　原因、緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動相傳質(zhì)，引起柱壓升高。

　　2）相同化合物的保留時間發(fā)生變化；

　　原因、如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會使化合物的保留時間發(fā)生變化.

　　3）色譜柱柱效下降；

　　原因、

　　1）有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；

　　2）凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時應(yīng)特別引起注意。

　　使用前和使用后的處理：

　　1、使用前的處理:

　　在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由、緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的（特別是做流動相的水為飽和的緩沖鹽溶液時）流動相進(jìn)行分析時，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時，緩沖鹽將會在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導(dǎo)致上述對色譜柱的損害.

　　2、使用后的處理：

　　用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相******的區(qū)別是，用于沖洗的流動相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內(nèi)不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn)。

　　用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相******的區(qū)別是，用于沖洗的流動相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內(nèi)不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn).緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動相保持一定的離子強(qiáng)度和ph值，減少拖尾。

　　3.使用注意事項:

　　1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用。

　　2、緩沖液******要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長時間實驗時會有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。

　　3、實驗后不可用有機(jī)溶劑直接過度，有機(jī)溶劑會處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95、5的水甲醇沖洗。

　　4、使用緩沖液要及時掌握ph范圍，做到胸中有數(shù)。

　　5、清洗液路和柱子時，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。

　　6、長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗）可以避免液路的堵塞。

　　7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。

　　如果流動相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來沖洗緩沖鹽的，是洗不出來的。通常賽分C18色譜柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來的，然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。******的方法是使用與流動相相同濃度不含鹽的流動相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以內(nèi)******，且用0.8的流速較好.如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，******用5%~10%甲醇水溶液沖.可以用純水代替流動相中的緩沖液，有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。

　　8、實驗室耗材色譜柱的選擇

　　1 如果需要購買色譜柱，或者是查看更多關(guān)于色譜柱技術(shù)方面的問題。

　　液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗。液相工作者接觸***多的是流動相，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的***主要源頭。做好液相色譜儀的正確操作，能極大的降低故障率，減少維修和停機(jī)成本。下面就來說一說在液相色譜儀使用中的注意事項。

　　一、泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。泵的使用要注意：

　　1.選擇的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um MS過濾膜過濾，并進(jìn)行脫氣處理。

　　2.泵開始使用時，一定要用合適的流動相*清洗干凈。

　　3.定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。

　　4.改變流動相時，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。

　　二、液相色譜法對液相色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。PS（推薦使用賽分色譜柱）所以說色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

　　1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況。因此在安裝時要輕拿輕放。

　　2.色譜柱PH使用范圍是2.0-9.0。當(dāng)使用PH值范圍邊界時，分析結(jié)束立即用與所使用流動相互溶的溶劑*清洗置換流動相。

　　3.每次分析結(jié)束后，都要對色譜柱進(jìn)行沖洗。每次工作完后，******用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。

　　4.若長時間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存。

　　三、檢測器是液相色譜的大腦，起著至關(guān)重要的作用。如何更好地發(fā)現(xiàn)和排除檢測器故障是液相色譜使用的*技能。

　　1、檢測器是液相色譜儀器的數(shù)據(jù)收集部分，由很多的電子和光學(xué)元件組成。禁止拆卸更動儀器內(nèi)部元件防止損壞或影響準(zhǔn)確度。

　　2、儀器內(nèi)部的流通池是流動相流過的元件，樣品的干凈程度和微生物的生長都可能污染流通池，導(dǎo)致無法檢測或檢測結(jié)果不準(zhǔn)，所以在使用了一段時間以后要先用水沖洗流通池和管路再換有機(jī)溶劑沖洗。

　　3、當(dāng)儀器檢測數(shù)據(jù)出現(xiàn)明顯波動，基線噪音變大時要沖洗儀器管路，沖洗后如果還是沒有改善就應(yīng)該檢測氘燈能量，如果能量不足就因更換新的氘燈。

　　4、儀器在每次使用完了以后都要用水和一定濃度的有機(jī)溶劑沖洗管路，保證下次使用時管路和系統(tǒng)的清潔。

固相萃取實質(zhì)上是一種液相色譜分離，其主要分離模式也與液相色譜相同，可分為正相（吸附劑極性大于洗脫液極性），反相（吸附劑極性小于洗脫液極性），離子交換和吸附。固相萃取所用的吸附劑也與液相色譜常用的固定相相同，只是在粒度上有所區(qū)別。

　　正相固相萃取的特點

　　固相萃取是一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。S是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。因其具有安全、回收率高，重現(xiàn)性好、操作簡便、快速、應(yīng)用范圍廣、易實現(xiàn)自動化操作等特點。

　　固相萃取方法的選擇

　　固相萃取技術(shù)的分離模式有多種，具體使用哪種方法，主要取決于待處理樣品的相對分子質(zhì)量(Mr)及樣品的性質(zhì)。

　　1.選擇固相萃取應(yīng)考慮的問題：

　　(1)待測物的化學(xué)性質(zhì):功能基團(tuán)、能否離子化，是水溶性還是脂溶性。

　　(2)基質(zhì)的性質(zhì):pH值、離子強(qiáng)度、是水還是有機(jī)溶劑。

　　(3)類似干擾物的性質(zhì)。

　　(4)待測物在樣品中的濃度。

　　(5)分析的檢測限及靈敏度。

　　(6)待測物是否需要富集、純化。

　　2.固定相的選擇(根據(jù)相似相溶原則來選擇固定相)：

　　S的固定相是樣品分離、純化的關(guān)鍵，由于固定相關(guān)系到S的重復(fù)性、回收率、靈敏度、特異性，因此S的吸附劑一直是人們關(guān)注的熱點。自S發(fā)明以來，聚合樹脂的樣品污染一直令人苦惱，因此，提供了C18鍵合硅膠制成一次性小柱，具有很高的可靠性和穩(wěn)定性，已廣泛應(yīng)用于臨床生化檢驗。凡可用于HPLC的吸附劑均可用于S，包括近年來針對藥物濫用檢測的“designerphase”。吸附劑的選擇既要考慮樣品各組分與固定相的親和力、待測物與洗脫劑的作用力，還要考慮其通用性。

　　就目前化學(xué)鍵合相而言，非極性鍵合相有C1、C2、C4、C6、C8、環(huán)己烷基、苯基、二苯基、C18等;極性和弱離子交換相有:氰基、二醇基、氨基、伯胺/仲胺基、丁酸基;強(qiáng)離子交換相有:丙磺酸基、苯磺酸基、季銨基等;吸附樹脂有:XAD-2、GDX、X-5。具有選擇專屬性的苯基磺酸可用于分離共平面連位羥基結(jié)構(gòu)分子。對于生物樣品，大多溶解在水性物質(zhì)里，待測物被離子化，用離子交換萃取分離極性很強(qiáng)的物質(zhì)，非極性或弱極性分析物用R-P提取，正相萃取用于提取有機(jī)溶劑中的極性物質(zhì)。吸附劑的用量必須保證從樣品中有效吸附所有的待測物，不保留基質(zhì)成分，增加吸附劑的量可增大吸附能力，但同時也增大洗脫體積，使待測物稀釋，給干燥和定量帶來困難。因此在達(dá)到有效吸附的前提下用***小量的吸附劑。

　　什么是細(xì)胞培養(yǎng)皿

　　細(xì)胞培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實驗室器皿，由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成，一般用玻璃或塑料制成。它***初由在德國生物學(xué)家羅伯特·科赫手下工作的細(xì)菌學(xué)家朱利斯·理查德·佩特里（Julius Richard Petri，1852－1921）于1887年設(shè)計，故又稱為“佩特里皿”。培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎，故在清洗及拿放時應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。使用完畢的培養(yǎng)皿******及時清洗干凈，存放在安全、固定的位置，防止損壞、摔壞。

　　細(xì)胞培養(yǎng)皿的清洗步驟

　　一般經(jīng)過浸泡、刷洗、浸酸和清洗四個步驟。

　　1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然后用5%鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。

　　2.刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角，并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。

　　3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強(qiáng)氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于六小時，一般過夜或更長。放取器皿要小心。

　　4.沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸后器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿，每件器皿至少要反復(fù)“注水－倒空”15次以上，***后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。

　　液相色譜儀峰分叉怎么回事？

　　造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染，或柱頭填料塌陷導(dǎo)致的。

　　對于******種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。

　　對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。

　　如何排除液相色譜儀氣泡溢出故障？

　　流動相內(nèi)產(chǎn)生都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡，主要是因為過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。

　　過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時即可。

　　自檢時有時會出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯誤？

　　一般來說，原因是系統(tǒng)中有擋光物，光路偏離，鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時首先要檢查光度室是否有擋光物；打開檢測器光源室蓋，檢查氘燈是否點亮；如果氘燈不亮，則關(guān)機(jī)，更換新氘燈，換時，需注意型號；檢查氘燈保險絲，看是否松動、氧化、燒斷；如果故障，應(yīng)立即更換；再開機(jī)重新自檢；若仍出現(xiàn)上述故障，則重新安裝軟件后再進(jìn)行自檢。

　　出現(xiàn)壓力波動大，流量不穩(wěn)定？

　　造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

　　液相色譜儀峰面積重復(fù)性不好？

　　主要原因可能有進(jìn)樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對******種情況，處理時應(yīng)對更換進(jìn)樣閥墊圈；對于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無機(jī)鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，*溶解，盡量減少對色譜柱的污染，以延長色譜柱的使用壽命，同時避免注射過濃的樣品溶液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

　　液相色譜柱壓升高？

　　造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體，造成流體阻力加大所引起的。例如，緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)，或樣品污染沉積。針對******種情況，處理時應(yīng)先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定)，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上

　　關(guān)于標(biāo)示：

　　1.液相色譜柱的流向不能改變

　　在我們常規(guī)思維中，色譜柱上標(biāo)示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒有想過這個方向的作用是什么呢？為什么要標(biāo)示一個使用方向呢？

　　其實色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標(biāo)示方向的目的就是讓我們在使用中記住流動相從哪個方向流入色譜柱，那么這個流入段就是***先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護(hù)或再生色譜柱做了準(zhǔn)備，而我們需要遵循這個規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開始做樣后。

　　我曾將已經(jīng)污染過的色譜柱反方向來使用，如果保留時間不是很長，而色譜柱足夠長，還是能使用一段時間的。

　　2.不去看說明書，直接就上機(jī)使用

　　色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要看清楚，因此色譜柱的說明書一定要看清楚，當(dāng)然也包括說明書上建議的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)定，對我們都非常的有用。對于反相柱來說，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因為正相柱除了可以適用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，因此一定要看清楚，對于你的方法來說是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。

　　關(guān)于沖洗：

　　3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈

　　使用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱對內(nèi)部填料的損傷是******的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱******的方法是用流動相比例的水系和有機(jī)系來沖洗。如果你認(rèn)為流動相比例無法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機(jī)系占有比例過大，你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來沖洗。

　　關(guān)于保存：

　　4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用

　　理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機(jī)系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時間。可以是0.5ml/min，120min，但******咨詢廠家，根據(jù)色譜柱參數(shù)設(shè)定。

　　5.色譜柱應(yīng)該保存在純乙腈或甲醇中

　　根據(jù)第4條，色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在一定程度上減少一些有機(jī)系的揮發(fā)。如果再增加一個保險，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。同樣道理，色譜柱一段時間不用后，也應(yīng)該按照第4條，進(jìn)行小流速的沖洗色譜柱。

　　關(guān)于再生：

　　6.色譜柱污染后把篩板卸下來超聲清洗

　　對于色譜柱的污染，*的就是篩板，因此我們***常用的做法就是把柱頭卸下來，把篩板拿去超聲清洗。但是我們在拆卸過程中對色譜柱前端填料的損害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于污染照成的傷害，因為我們不是專業(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。

　　7.自己填裝色譜柱

　　和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會是個什么樣也就很明顯了。

　　在我看來，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個過程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。

　　8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了

　　這種情況我自己就遇到過，還好那根柱子本來就打算報廢了，因此也沒有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實很簡單，就是在我反向沖洗前沒有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說，方法是沒有錯的，色譜柱受污染時，我們應(yīng)該先想到儀器也污染了！

　　9.色譜柱的選擇

　　如果需要購買色譜柱，液相色譜柱，反相柱，正相柱，離子交換柱，等等，或者是需要查看更多關(guān)于液相色譜柱維護(hù)知識。

　　MS-Clean?凍存管是由透明高分子材料聚丙烯制成的,經(jīng)特殊工藝制造,使其能耐受超低溫,并保證無泄露,管體可有清晰準(zhǔn)確得刻度和手寫的空白標(biāo)簽,方便記錄,凍存管適用于細(xì)胞和組織的長期超低溫冷藏。

　　MS-Clean?凍存管產(chǎn)品特征：

　　管壁均勻,透明,帶可立裙邊

　　管提印有準(zhǔn)確的刻度和可寫入空白標(biāo)簽區(qū),方便實驗過程的記錄

　　精密螺旋蓋,確保液體不外泄，并有效防止液氮的入侵

　　耐溫范圍：-80。C~121。C

　　大儲液量為量人刻度的80%

　　Y射線消毒滅菌

　　MS-Clean?凍存管產(chǎn)品用途：

　　冷凍儲藏細(xì)胞,標(biāo)本,溶液:臨床診斷,生物技術(shù)。

　　藥學(xué)和化學(xué),環(huán)境檢測,食品檢測。

　　貨號

　　描述

　　包裝（只/包）

　　包裝（只/箱）

　　MS-Clean?凍存管

　　LBFT18S

　　凍存管1.8ml,自立式,滅菌

　　500

　　11000

　　LBFT50S

　　凍存管5.0ml,自立式,滅菌

　　200

　　4400

　　氣相色譜儀無論在工業(yè)生產(chǎn)過程還是日常生活中的使用都得到廣泛應(yīng)用，為達(dá)到使用者正確操作和保養(yǎng)，以下關(guān)于***新氣相色譜簡略的使用方法和說明。

　　1、對色譜儀分析室的要求

　　（1）分析室周圍不得有強(qiáng)磁場，易燃及強(qiáng)腐蝕性氣體。

　　（2）室內(nèi)環(huán)境溫度應(yīng)在5~35度范圍內(nèi)，濕度小于等于85%（相對濕度），且室內(nèi)應(yīng)保持空氣流通。有條件的廠******安裝空調(diào)。

　　（3）基本具備好3000x800x600 (長X寬X高) (mm)的能承受整套儀器，便于操作的工作平臺。平臺不能緊靠墻，應(yīng)離墻0.5~1.0米，便于接線及檢修用。

　　（4）為防止電壓波動造成檢測的干擾應(yīng)裝備單獨容量在10KVA左右的動力線路電源。

　　2、氣源準(zhǔn)備及凈化

　　（1）氣源準(zhǔn)備，事先準(zhǔn)備好需用氣體的高壓鋼瓶（一般大中城市均可購到），裝某一種氣體的鋼瓶只能裝這種氣體，每個鋼瓶的顏色代表一種氣體，不能互換。一般用高純氮氣，高純氫氣，無油空氣這三種氣體，每種氣體******準(zhǔn)備兩個鋼瓶，以調(diào)換備用。有的廠使用氮氣發(fā)生器、氫氣發(fā)生器和空氣壓縮機(jī)也可，但空壓機(jī)必須無油。凡鋼瓶氣壓下降到1~2Mpa時，應(yīng)更換氣瓶。一般廠家使用使用以上氣體99.99%即可，如氣相色譜儀配備電子捕獲檢測器******使用鋼瓶高純氣源，純度在99.999%以上。

　　（2）氣源凈化為了出去各種氣體中可能含有的水分，灰分和有機(jī)氣體成分，在氣體進(jìn)入儀器之前應(yīng)先經(jīng)過嚴(yán)格凈化處理。現(xiàn)在國內(nèi)的氣體發(fā)生器具有較高的發(fā)展技術(shù)，一般配置分子篩或活性炭過濾凈化裝置，基本可以滿足氣相色譜儀要求。若使用鋼瓶高純氣體，則需要進(jìn)行凈化過濾后使用。對一些的色譜儀附有凈化器，且內(nèi)已填有分子篩，活性炭，硅膠，基本可滿足要求。

　　3、氣相色譜儀成套性檢查及安放

　　儀器開箱后，按資料袋內(nèi)附件清單，進(jìn)行逐項清點，并將易損零件的備件予以妥善保存。然后按照儀器的使用說明書上要求，將其放置于工作平臺上，并對著接線圖和各插頭，插座將儀器各部分連接起來，***后連接色譜工作站。

　　4、色譜儀氣路連接和氣路氣密性檢查

　　對于氣相色譜儀氣路鏈接一般由色譜儀生產(chǎn)廠家工程技術(shù)人員進(jìn)行，在無法達(dá)到滿足的情況下應(yīng)嚴(yán)格按照使用說明書中要求在專業(yè)人員指導(dǎo)下安裝連接。

　　氣密性檢查是一項十分重要的工作，若氣路有漏，不僅直接導(dǎo)致儀器工作不穩(wěn)定或靈敏度下降，而且還有發(fā)生泄漏的危險，特別是氫氣更應(yīng)該加以重視。氣相色譜儀氣密檢查一般是檢查載氣流路，其重點是管路接頭處，對于氫氣和空氣流路也要做相應(yīng)的檢查。

　　液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法，目前已經(jīng)發(fā)展到一個全新的階段。高精度的輸液泵，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域。

　　應(yīng)用HPLC技術(shù)在血藥濃度、生物胺、核苷酸、蛋白質(zhì)濃度測定等實際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗，在這里與大家交流，希望能對同行們有所幫助和借鑒，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展。

　　液相色譜儀使用過程中常見問題分析

　　（一）液相色譜柱柱壓問題

　　液相色譜柱壓過高，導(dǎo)致這種情況的直接原因可能是液相色譜柱或進(jìn)樣器流動不暢通。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動相抽濾不干凈，存有雜質(zhì)，從而堆積在色譜柱或過濾器中，這時只要重新配置一遍流動相。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱，確定其流動是否暢通，具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開，看看是否有流動相流出，同時可以調(diào)節(jié)流速，觀察流動相流出的流量，進(jìn)而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因，比如：流動相的流速過大（一般為1.0ml/min）、流動相的成分不符合標(biāo)準(zhǔn)（沒有使用HPLC級別的試劑或者沒有超聲*）等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可。如果懷疑是在線過濾器堵了可以關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速為1ml/min，如壓力>3kgf/cm2，則可能堵塞，可以考慮將其置于5%稀硝酸，超聲波清洗一段時間。***后******在檢測驗樣品的時候加一個保護(hù)柱。有時候也會柱壓過低，發(fā)生這個原因主要是連接不牢固，導(dǎo)致漏液，擰緊即可。更換流動相時沒有進(jìn)行脫氣，導(dǎo)致儀器里面進(jìn)入空氣，一般的解決方法就是卸下超聲清洗，然后進(jìn)行脫氣。

　　（二）基線漂移

　　在液相色譜儀啟動之前，通常先啟動半個小時后再進(jìn)行操作，這樣做是避免基線漂移。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多，其一是色譜柱溫差變化大，需要控制柱溫，用色譜純，也可多抽濾幾次，除去醇溶性流動相外的其他流動相要勤更換，做到現(xiàn)配現(xiàn)用，以免滋生微生物，堵塞進(jìn)樣通道，造成基線不穩(wěn)定，影響出峰。第三個原因是流路本身長期進(jìn)樣沒有時間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì)。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動的通道，對于反相色譜系統(tǒng)的流動相******甲醇-水系統(tǒng)，按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì)，以免影響樣品的質(zhì)量。必要時可以用異丙醇。第四個可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了，不能再繼續(xù)工作，解決方法是換紫外燈。***后是樣品本身性質(zhì)的影響，對于流動相的影響較大，解決方法就是用保護(hù)柱檢測樣品，以免出現(xiàn)問題。

　　離子色譜儀可廣泛應(yīng)用于環(huán)境連續(xù)檢測、生產(chǎn)過程連續(xù)檢測等領(lǐng)域，該產(chǎn)品針對離子色譜法的在線檢測問題，進(jìn)行了離子色譜法的在線檢測方法及檢測工藝、色譜數(shù)據(jù)的在線自動處理、產(chǎn)品的檢測能力及檢測精度等方面的研究，技術(shù)屬集成創(chuàng)新，其技術(shù)創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在：

　　1、設(shè)計了離子色譜法的在線檢測流程，并采用嵌入式系統(tǒng)，實現(xiàn)了三通道并行全自動檢測。

　　2、采用電導(dǎo)法的在線檢測工藝及數(shù)據(jù)自動處理技術(shù)，可同時自動檢測陰離子F-、Cl-、NO2-、PO43-、Br-、NO3-、SO42-和陽離子Li、Na、NH4、K、Ca2、Mg2。3、創(chuàng)新性地提出了流動伏安檢測方法，實現(xiàn)了重金屬離子Cu2、Zn2、Pb2、Cd2的在線檢測。

　　離子色譜柱的維護(hù)：

　　1、進(jìn)入色譜柱的樣品，均需要對其進(jìn)行前處理。樣品中固體懸浮物、有機(jī)物和重金屬是影響色譜柱柱效的三大因素。

　　固體懸浮物的消除：使用0.45或0.22微米孔徑的微孔濾膜將樣品過濾即可。

　　有機(jī)物：固態(tài)樣品，其各檢測組份對高溫仍比較穩(wěn)定的，可以采用高溫灰化-淋洗液或去離子水浸取法將有機(jī)，離子色譜儀直接IC檢測。

　　液態(tài)樣品，可以采用22%雙氧水微波消解1.5h除去有機(jī)物后調(diào)節(jié)PH至中性，直接IC進(jìn)樣檢測。(注意溶液濃度之間的換算)

　　重金屬：可以將樣品流經(jīng)陽離子交換樹脂除去重金屬后直接IC進(jìn)樣。

　　2、組份高含量樣品影響離子色譜柱柱效。

　　高Cl樣品的處理：將樣品通過Ag處理柱將Cl-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。

　　高SO42樣品的處理：將樣品通過Bs處理柱將SO42-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。

　　3、實驗操作完畢，離子色譜柱用淋洗液密封保存。

　　離子色譜是液相色譜的一種，故又稱離子色譜（HPIC）或現(xiàn)代離子色譜，其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量，進(jìn)樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對淋出液進(jìn)行在線自動連續(xù)電導(dǎo)檢測。離子色譜法是液相色譜法中分離分析溶液中離子組分的方法。離子色譜中使用的固定相是離子交換樹脂。離子交換樹脂上分布有固定的帶電荷的基團(tuán)和能游動的配位離子。

　　在實驗過程中經(jīng)常遇到的情況：

　　新的氣相色譜柱，直接上分析條件來分析樣品，發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。

　　新的氣相色譜柱，使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。

　　新的氣相色譜柱，發(fā)現(xiàn)分離度、保留時間發(fā)生了變化。

　　氣相色譜柱使用不頻繁，一開始分析樣品效果比較好，但是，在使用過程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。

　　氣相色譜峰形異常，基線不穩(wěn)。

　　當(dāng)發(fā)生以上情況，請仔細(xì)檢查，是否有某個操作疏忽了？

　　1)測試柱性能

　　通常情況下，我們建議用戶在拿到氣相色譜柱后，******件事情就是在一臺性能完好的儀器系統(tǒng)上，按照廠家說明書對氣相色譜柱進(jìn)行柱效測試。其實，對于一個合格的色譜分析工作者來說，拿到一根新色譜柱，要開始一個課題之前，都會這樣做，目的有二：一、了解氣相色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測結(jié)果小心保存，當(dāng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常時，在檢測柱效進(jìn)行對比，來進(jìn)一步排查原因。

　　2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時，注意過渡

　　在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時，一定要注意應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，造成系統(tǒng)堵塞。另外，在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時，要仔細(xì)檢查，段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。氣相色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)

　　3)當(dāng)更換氣相色譜柱時，原來的實驗情況發(fā)生變化.

　　首先，如果之前開發(fā)方法時色譜柱已經(jīng)做過別的樣品，那么之前的樣品或使用的流動相對這個樣品分析可能有干擾，只能重新找條件。建議：開發(fā)方法時使用新的氣相色譜柱。(其次，如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況，可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同，造成了選擇性的細(xì)微差異 ，需要調(diào)整條件，并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會改變)。

　　再次，如果是更換了同品牌型號的新的氣相色譜柱發(fā)生這種情況，請檢查之前分離時目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5)，如果一開始只是勉強(qiáng)分開(Rs小于1.5)，那只能說明方法沒有優(yōu)化好，需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)

　　4)樣品及前處理

　　樣品要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(S)對樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純，配流動相的水******是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

　　5)氣相色譜柱基線問題

　　通常情況，基線問題是由于系統(tǒng)或者流動相引起的，和色譜柱關(guān)系不大。

　　可能導(dǎo)致的原因：

　　(1)泵頭進(jìn)氣泡

　　(2)系統(tǒng)污染

　　(3)流通池漏液

　　(4)流動相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測波長不合適)

　　(5)檢測波長低，水的質(zhì)量不好等等。

　　6)KB氣相色譜柱沖洗保養(yǎng)

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